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克隆感受态_热激

电竞通

文字:[大][中][小] 2015-8-26    浏览次数:3551    

XL2-Blue Chemically Competent Cell 产品说明书 





产品规格 (CAT#: DL1035)

XL2-Blue:                                                       100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                       10μl

保存条件(保质期):                               -80℃(6个月)


基因型

TetR Δ(mcrA)183 Hte [F´ {proAB lacIq lacZΔM15 Tn10 (TetR) Amy CamR}] Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1



产品说明

XL2-Blue菌株来源于XL1-Blue菌株,为Hte (high transformation efficiency)基因型,Hte是Stratagene开发的特异性提高感受态转化效率及大质粒转化能力的宿主菌基因型,已成功应用于40 kd质粒的构建。Hte使得XL2-Blue适用于大质粒DNA和重组产物的转化,降低片段大小的偏爱性,多用于文库构建。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。hsdSMR突变导致EcoK核酸内切酶系统缺失,增强了外源DNA的稳定性和提取质量。lacM15的存在使XL2-Blue菌株可用于蓝、白斑筛选。此菌株具有四环素和氯霉素抗性。XL2-Blue感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率>10cfu/μg DNA。 


操作方法

1. XL2-Blue感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA (质粒或连接产物) 并用手拨打EP管底轻轻混匀 (避免用枪吸打),冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基 (2YTLB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。

4. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YTLB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少14 h


注意事项

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。





说明书下载

XL2-Blue Chemically Competent Cell 产品说明书



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